大肠杆菌感受态细胞制备实验（大肠杆菌感受态细胞如何制备）

本文目录一览：

• 1、大肠杆菌感受态细胞的制备要注意哪些因素
• 2、大肠杆菌感受态细胞的制备及质粒的转化结果怎么分析?
• 3、用CaCl2制备感受态细胞怎么总是失败
• 4、大肠杆菌感受态细胞的制备方法步骤谁能介绍下!
• 5、氯化钙制备感受态细胞的原理
• 6、大肠杆菌有没有中介体?

大肠杆菌感受态细胞的制备要注意哪些因素

1、弃去上清，加入4ml预冷含15%甘油的0.05mol/l的cacl2 溶液，轻轻悬浮细胞，冰上放置几分钟，即成感受态细胞悬液。感受态细胞分装成200μl的小份，贮存于-70℃可保存半年。

2、．细菌的生长状态：实验中应密切注视细菌的生长状态和密度，尽量使用对数生长期的细胞（一般通过检测OD600来控制。DH5α菌株 OD600为 0.5 时细胞密度是 5 × 107/ml ）。2．所有操作均应在无菌条件和冰上进行。

3、方法一：细菌转化的方法多以Mendel和Higa（1970）的发现为基础，其基本方法是用冰预冷的CaCl2或多种2价阳离子等处理细菌，使之进入感受态得以转化。用CaCl2制备新鲜或冷冻的大肠杆菌感受态细胞，常用于成批制备感受态细菌。

大肠杆菌感受态细胞的制备及质粒的转化结果怎么分析?

材料及方法 菌种：大肠杆菌BL21菌株 质粒：pGEX-6P-1感受态制备方法：CaCl2法 转化方法：热激法 CaCl2制备感受态的原理。

感受态细胞100 μL分装，贮存于-70 ℃保存备用。

低Ca2+诱导大肠杆菌摄取DNA可能主要是后者的作用。因此，Ca2+诱导大肠杆菌建立感受态并实现DNA转化，既是一个物理化学过程，也是细胞自身生理调节的反应过程。

用CaCl2制备感受态细胞怎么总是失败

首先要掌握好培养时间，细胞对数生长期的时候再做，一般OD600为0.5左右。其次，在制备的时候要注意一定要整个过程都在冰上，保持低温很重要，特别是离心过程，冷冻离心机要先预冷后再用。

感受态不好。“待细菌达到对数生长期（OD600为0.5-0.6）”，你测OD了吗？其实很麻烦，建议稍微有点混就好用了；感受态细菌在无抗生素培养基上能否生长？菌株与质粒不兼容。转化体系也很关键。

．经 CaCl2处理的细胞，在低温条件下，一定的时间内转化率随时间的推移而增加，24小时达到最高，之后转化率再下降（这是由于总的活菌数随时间延长而减少造成的）。

不知道您到底想知道什么？制备感受态细胞当然要冷冻啦，冷热交替使得细胞壁很脆弱，这样外源dna导入才更加容易。在制备转基因时，导入外源dna方法有很多的，不过目前比较简单和普遍的做法就是用氯化钙处理的。

感受态细胞的质量：所用的CaCl2等试剂均需是最高纯度的，并用最纯净的水配制，最好分装保存于4℃ （3）细胞的生长状态和密度 最好从-70℃或-20℃甘油保存的菌种中直接转接用于制备感受态细胞的菌液。

影响转化效率的因素很多，主要有：感受态细胞制备的质量、受体菌生长期（大肠杆菌在对数生长期易产生感受态）、质粒的大小和构型、所用试剂的纯度、接种前菌种的保藏方式、冰浴时间（延长冰浴时间可略微提高转化率）。

大肠杆菌感受态细胞的制备方法步骤谁能介绍下!

1、大肠杆菌感受态细胞的制备（CaCl2法）（1）从新活化的E.coli DH5α菌平板上挑取一单菌落，接种于3～5ml LB液体培养中，37℃振荡培养12h左右，直至对数生长期。

2、将培养液转入离心管中，冰上放置10分钟，然后于4℃下3000g离心10分钟。弃去上清，用预冷的0.05mol/l的cacl2 溶液10ml轻轻悬浮细胞，冰上放置15-30分钟后，4℃下3000g离心10分钟。

3、挑取大肠杆菌单菌落，接种于5 ml无抗生素的LB液体培养基中，37℃下振荡培养13h，至对数生长后期。将该菌悬液以1：50 的比例接种于100 ml LB 液体培养基中，37℃振荡培养2-3h至OD600＝0.5。

氯化钙制备感受态细胞的原理

用氯化钙溶液制取感受态细胞的原理是：氯化钙溶液可使得细胞膨胀，细胞膜磷脂双分支层形成液晶结构，使细胞的通透性变大，便于外源基因或载体进入感受态细胞。

钙离子的作用是结合于细胞膜上，是细胞膜呈现一种液晶态。在冷热变化 *** 下液晶态的细胞膜表面会产生裂隙，使外源DNA进入。

原理：转化：将外源DNA分子引入受体细菌，使之获得新的遗传性状。受体细菌一般是限制修饰系统缺陷的变异株，不含限制性内切酶和甲基化酶的突变体（R-，M-），可以容忍外源DNA分子进入体内并稳定地遗传给后代。

感受态细胞转化原理：主要原理就是通过处理使细胞的通透性变大，直观的说，使得细胞膜表面出现一些孔洞，便于外源基因或载体进入感受态细胞。

感受态细胞是一种经过特殊处理，能够接受外源DNA的细胞状态，常用于基因克隆和转基因研究中。氯化钙在制备感受态细胞中起着重要作用，比如在感受态细胞制备过程中，细胞需要经历一个短暂的、人为的高钙环境。

大肠杆菌有没有中介体?

虽然细菌没有线粒体，但是某些细菌也能进行有氧呼吸。例如，硝化细菌。细菌的呼吸链位于细胞膜上。研究发现，细菌细胞膜可以形成一种特有的结构――用电子显微镜观察，可以看到细胞膜向胞浆凹陷折叠成囊状物，称为中介体。

你好~大肠杆菌是原核生物，没有成型细胞核（也称为没核膜包被的细胞核、没以核膜为界限的细胞核）和众多的细胞器（线粒体，叶绿体，内质网，高尔基体，中心体，溶酶体），只有核糖体一种细胞器。

大肠埃希氏菌（Escherichia coli ）通常称为大肠杆菌，1885年由Escherich发现，分布在自然界，大多数是不致病的，主要附生在人或动物的肠道里，为正常菌群，少数的大肠杆菌具有毒性，可引起疾病。大肠杆菌有感受态。