简单染色法(单染色法的基本步骤有哪些有何注意事项)

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本文目录

1. 单染色法的基本步骤有哪些有何注意事项
2. 普通染色的过程
3. 细菌的简单染色方法谁能介绍下
4. 简单染色法用途是什么

单染色法的基本步骤有哪些有何注意事项

一、单染色法的基本步骤：

1．涂片取两块干净的载玻片，各滴一小滴生理盐水于载玻片中央，用无菌操作，分别挑取金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌于二载玻片的水滴中，调匀并涂成薄膜。注意滴生理盐水时不宜过多，涂片必须均匀。

2．干燥于室温中自然干燥。

3．固定涂片面向上，于火焰上通过2—3次，使细胞质凝固，以固定细菌的形态，并使其不易脱落。但不能在火焰上烤，否则细菌形态将毁坏。

4．染色放标本于水平位置，滴加染色液于涂片薄膜上，染色时间长短随不同染色液而定。吕氏碱性美兰染色液约染2-3分钟，石炭酸复红染色液约染1-2分钟。

5．水洗染色时间到后，用自来水冲洗，直至冲下之水无色时为止。注意冲洗水流不宜过急，过大，水由玻片上端流下，避免直接冲在涂片处。冲洗后，将标本晾干或用吹风机吹干，待完全干燥后才可置油镜下观察。

6．镜检按实验程序进行显微镜观察。

二、注意事项：

(1)载玻片要清洁无油污，否则菌液不易涂开。涂片时取培养物宜少，培养物涂层宜薄，涂层过厚则不易观察细菌形态。

(2)干燥和固定时，玻片不能直接在离火焰很近的位置上烘烤，否则会破坏细菌形态并使之变形，影响观察结果。

(3)观察时如需用到油镜，油镜检查前玻片应完全干燥，观察后要将油镜用擦镜纸等彻底擦拭干净。

单染色法原理：

简单染色法即只用一种染料对涂片进行染色，该法简便易行，适用于菌体的一般形态观察。通常情况下由于细菌菌体多带负电荷，易和带正电荷的碱性染料结合而被染色，因此常用碱性染料进行简单染色，如美蓝、碱性复红、结晶紫、孔雀绿、番红等。

所有的苯胺染料，均可用来做简单染色法的染色剂。在进行染色之前的制片过程是影响染色结果好坏的关键性步骤。

普通染色的过程

(1)涂片：取一块干净的载玻片,并在其中央滴一小滴生理盐水(或无菌蒸馏水)。接种环在酒精灯上杀菌后从斜面挑取少量菌种(金黄色葡萄球菌或枯草杆菌)与玻片上的水滴混匀后,涂布成一均匀的薄层。涂布面一般以直径1cm大小范围为宜。(2)干燥与固定：涂片最好在室温下使其自然干燥。亦可在酒精灯上微微加热,加速水分蒸发,但切勿过热。固定时,在酒精灯火焰外层尽快地来回通过2~3次,多为2~3s,以载玻片背面不觉烫手为宜,放置待冷后,进行染色。

(3)染色：在涂片上滴染色液一滴,使染色液覆盖涂片,染色约1min。

(4)水洗：斜置载玻片,在来自水龙头下用小股水线冲洗,直至洗下的水呈无色为止。

(5)干燥：用吸水纸吸去涂片边缘的水珠,置室温下自然干燥或微微加热,以加快干燥速度。注意用吸水纸时切勿将菌体擦掉。

(6)镜检：用显微镜观察,并用铅笔绘出细菌形态图。

2.革兰氏染色法：革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。

革兰氏染色是一种复染色法(由两种或多种染料染色的方法,称复染色法,又叫鉴别染色法)。

革兰氏染色法(Gramstain)不仅能观察到细菌的形态而且还可将所有细菌区分为两大类:染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌,用G+表示;染色反应呈红色(复染颜色)的称为革兰氏阴性细菌,用G¯表示。

革兰氏染色需要的试剂主要有草酸铵结晶紫染液、碘液、石炭酸复红染液、95%乙醇、番红染液、香柏油、二甲苯。•染色流程：制片干燥固定初染水洗媒染水洗脱色水洗复染水洗干燥观察

细菌的简单染色方法谁能介绍下

简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。

操作步骤

1．涂片：用灼烧灭菌冷却后的接种环挑取少量菌体与水滴充分混匀，涂成极薄的菌膜。

2．干燥：可自然晾干，或将涂片置于火焰高处微热烘干，但不能直接在火焰上烘烤。

3．固定：手执玻片一端，有菌膜的一面朝上，通过迅速通过火焰2-3次（用手指触涂片反面，以不烫手为宜）。

4．染色：加适量(以盖满菌膜为度)结晶紫染色液(或石炭酸复红液)，染l～2min。

5．水洗：用自来冲洗至流下的水中无染色液的颜色时为止。

6．干燥

7．镜检

简单染色法用途是什么

简单染色法用途是：适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。常用碱性染料进行简单染色。

简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。此法操作简便，适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。

革兰染色过程所用四种不同溶液和作用：

1、碱性染料：这在简单染色中已讨论过,此处用结晶紫。

2、媒染剂：其作用是增强染料与细菌的亲和力,更好地加强染料与细胞的结合.常用的媒染剂是碘液。

3、脱色剂：帮助染料从被染色的细胞中脱色。利用细菌对染料脱色的难易程度不同，而将细菌加以区分。革兰阳性细菌不易被脱色剂脱色，而革兰阴性细菌则易被脱色。常用的脱色剂是丙酮或乙醇，这里所用的是95%的乙醇。

4、复染液：也是一种碱性染料，目的是使脱色的细菌重新染上另一种颜色，以便与未脱色菌进行比较，这里用的是蕃红花红溶液。

扩展资料：

简单染色：

1、涂片：取一块干净的载玻片,并在其中央滴一小滴生理盐水(或无菌蒸馏水)。接种环在酒精灯上杀菌后从斜面挑取少量菌种(金黄色葡萄球菌或枯草杆菌)与玻片上的水滴混匀后,涂布成一均匀的薄层。涂布面一般以直径1cm大小范围为宜。

2、干燥与固定：涂片最好在室温下使其自然干燥。亦可在酒精灯上微微加热,加速水分蒸发,但切勿过热。固定时，在酒精灯火焰外层尽快地来回通过2~3次,多为2~3s,以载玻片背面不觉烫手为宜,放置待冷后,进行染色。

3、染色：在涂片上滴染色液一滴,使染色液覆盖涂片,染色约1min。

4、水洗：斜置载玻片,在来自水龙头下用小股水线冲洗,直至洗下的水呈无色为止。

5、干燥：用吸水纸吸去涂片边缘的水珠,置室温下自然干燥或微微加热,以加快干燥速度。注意用吸水纸时切勿将菌体擦掉。

6、镜检：用显微镜观察,并用铅笔绘出细菌形态图。

参考资料来源：百度百科——细菌染色法

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