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电泳怎么做 电泳这么做生物工程方面的电泳有没有具体步骤谢谢

大家好,今天来为大家分享电泳怎么做的一些知识点,大家要是都明白,那么可以忽略,如果不太清楚的话可以看看本篇文章,相信很大概率可以解决您的问题,接下来我们就一起来看看吧!

本文目录

  1. 电泳图怎么看
  2. 电泳这么做生物工程方面的电泳有没有具体步骤谢谢
  3. 电泳胶板怎么做
  4. 什么叫电泳,电泳主要用来做什么

电泳图怎么看

PCR跑胶只能估计产物的大小,所以你这四个图都是看:

有无产物

产物大小。

在已知目标序列,引物的情况小,可以计算出产物的大小,如果计算和PCR产物大小吻合,而且结果的条带也很清楚,这个条带就是特异性产物。

这4个图,每个胶的孔都加了不同的样本,所以根据条带,可以说明原来不同样本是否有目标序列可以被检出。

电泳这么做生物工程方面的电泳有没有具体步骤谢谢

电泳(Electrophoresis)是指带电荷的粒子或分子在电场中移动的现象称为电泳。大分子的蛋白质,多肽,病毒粒子,甚至细胞或小分子的氨基酸,核苷等在电场中都可作定向泳动.1937年Tis

elius成功地研制了界面电泳仪进行血清蛋白电泳,它是在一U型管的自由溶液中进行的,电泳后用光学系统使各种蛋白所形成折光率差别成为曲线图象,将血清蛋白分为白蛋白,α1-球蛋白,α2-球蛋白,β-球蛋白和γ-球蛋白五种,随后,Wielamd和Kanig等于1948年采用滤纸条做载体,成功地进行了纸上电泳。从那时起,电泳技术逐渐被人们所接受并予以重视,继而发展以滤纸,各种纤维素粉,淀粉凝胶,琼脂和琼脂糖凝胶,醋酸纤维素薄膜,聚丙烯酰胺凝胶等为载体,结合增染试剂如银氨染色,考马斯亮蓝等大大提高和促进生物样品着色与分辨能力,此外电泳分离和免疫反应相结合,使分辨率不断朝着微量和超微量(1ng~0.001ng)水平发展,从而使电泳技术获得迅速推广和应用。

目前所采用的电泳方法,大致可分为3类:显微电泳,自由界面电泳和区带电泳.区带电泳应用广泛,区带电泳可分为以下几种类型:

按支持物的物理性状不同,区带电泳可分为:

(1)滤纸为支持物的纸电泳;

(2)粉末电泳:如纤维素粉,淀粉,玻璃粉电泳;

(3)凝胶电泳:如琼脂,琼脂糖,硅胶,淀粉胶,聚丙烯酰胺凝胶电泳;

(4)缘线电泳:如尼龙丝,人造丝电泳

2.按支持物的装置形式不同,区带电泳可分为:

(1)平板式电泳:支持物水平放置,是最常用的电泳方式;

(2)垂直板电泳:聚丙烯酰胺凝胶可做成垂直板式电泳。

(3)柱状(管状)电泳:聚丙烯酰胺凝胶可灌入适当的电泳管中做成管状电泳.

3.按pH的连续性不同,区带电泳可分为:

(1)连续pH电泳:如纸电泳,醋酸纤维素薄膜电泳;

(2)非连续pH电泳:如聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳;

电泳所需的仪器

电泳所需的仪器有:电泳槽和电源。

1.电泳槽

电泳槽是电泳系统的核心部分,根据电泳的原理,电泳支持物都是放在两个缓冲液之间,电场通过电泳支持物连接两个缓冲液,不同电泳采用不同的电泳槽.常用的电泳槽有:

(1)圆盘电泳槽:有上,下两个电泳槽和带有铂金电极的盖。上槽中具有若干孔,孔不用时,用硅橡皮塞塞住.要用的孔配以可插电泳管(玻璃管)的硅橡皮塞。电泳管的内径早期为5~7mm,为保证冷却和微量化,现在则越来越细.

(2)垂直板电泳槽:垂直板电泳槽的基本原理和结构与圆盘电泳槽基本相同。差别只在于制胶和电泳不在电泳管中,而是在块垂直放置的平行玻璃板中间.

(3)水平电泳槽:水平电泳槽的形状各异,但结构大致相同。一般包括电泳槽基座,冷却板和电极.

电源

要使荷电的生物大分子在电场中泳动,必须加电场,且电泳的分辨率和电泳速度与电泳时的电参数密切相关。不同的电泳技术需要不同的电压,电流和功率范围,所以选择电源主要根据电泳技术的需要.如聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS电泳需要200~600V电压。

http://baike.baidu.com/view/25110.htm?fr=aladdin

电泳胶板怎么做

根据分离要求确定是琼脂糖还是聚丙烯酰胺,根据分离分子的分子量确定浓度;

加水加热融化,装好梳齿,合适温度加入显色剂(或者跑完电泳染色),倒胶板。

以下为琼脂糖凝胶电泳的操作:

1选择合适的水平式电泳槽,调节电泳槽平面至水平。检查稳压电源与正负极的线路;

2选择孔径大小合适的点样梳子,垂直架在电泳胶模的一端,使点样梳子底部离电泳胶模底部的距离为1.0mm;

3按待分离DNA,配制相应浓度琼脂糖,100℃水浴加热至琼脂糖融化均匀;

4用吸管取少量琼脂糖凝胶溶液将电泳胶模四周密封好,防止浇灌琼脂糖凝胶板时发生渗透。待琼脂糖凝胶冷却至50℃左右时,加入6μl核酸染料,摇匀,轻轻倒入电泳胶模中,琼脂糖凝胶的厚度在3~5mm。倒胶时要避免产生气泡,若有气泡可用吸管小心吸去;

5琼脂糖凝胶凝固后,在室温放置20min,小心拔掉点样梳子和电泳胶模两端的挡板,保持点样孔的完好;

6将电泳胶模放入电泳槽中,加入电泳缓冲液,使电泳缓冲液面高出琼脂糖凝胶表面1~2mm。如点样孔内有气泡,用吸管小心吸出,以免影响加样;

7将10μlDNA样品与2μl体积的溴酚蓝指示剂点样缓冲液混合。上样缓冲液不仅可以提高样品的密度,使样品均匀沉到样品孔内,还可以使样品带颜色,便于上样和估计电泳时间和判断电泳的位置;

8用微量移液器将样品小心加入加样孔内,记录样品点样秩序;

9盖上电泳槽,开启电源开关,最高电压不超过5V/cm(100~150V恒压电泳),使DNA从负极向正极移动;

10电泳时间随实验的具体要求而异。电泳一般需1~3小时。电泳完毕后关闭电源,戴一次性塑料手套取出凝胶,尽可能将所有的电泳缓冲液淋干,在254nm波长的透射紫外灯下观察。

什么叫电泳,电泳主要用来做什么

带电颗粒在电场作用下,向着与其电性相反的电极移动,称为电泳(electrophoresis,EP)。利用带电粒子在电场中移动速度不同而达到分离的技术称为电泳技术。

1807年,由俄国莫斯科大学的斐迪南·弗雷德里克·罗伊斯(FerdinandFredericReuss)最早发现。

1936年瑞典学者A.W.K.蒂塞利乌斯设计制造了移动界面电泳仪,分离了马血清白蛋白的3种球蛋白,创建了电泳技术。

电泳应用:

1、聚丙烯酰胺凝胶电泳可用做蛋白质纯度的鉴定。

聚丙烯酰胺凝胶电泳同时具有电荷效应和分子筛效应,可以将分子大小相同而带不同数量电荷的物质分离开,并且还可以将带相同数量电荷而分子大小不同的物质分离开。

其分辨率远远高于一般层析方法和电泳方法,可以检出10-9~10-12g的样品,且重复性好,没有电渗作用.

2、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳可测定蛋白质分子量。

3、聚丙烯酰胺凝胶电泳可用于蛋白质定量。

电泳后的凝胶经凝胶扫描仪扫描,从而给出定量的结果.凝胶扫描仪主要用于对样品单向电泳后的区带和双向电泳后的斑点进行扫描。

4、电泳可用于检查蛋白质制剂的纯度,分析蛋白质混合物的组分。

扩展资料:

电泳基本原理:

生物大分子如蛋白质,核酸,多糖等大多都有阳离子和阴离子基团,称为两性离子。常以颗粒分散在溶液中,它们的静电荷取决于介质的H+浓度或与其他大分子的相互作用。

在电场中,带电颗粒向阴极或阳极迁移,迁移的方向取决于它们带电的符号,这种迁移现象即所谓电泳。

如果把生物大分子的胶体溶液放在一个没有干扰的电场中,使颗粒具有恒定迁移速率的驱动力来自于颗粒上的有效电荷Q和电位梯度E。它们与介质的摩擦阻力f抗衡。在自由溶液中这种抗衡服从Stokes定律。

这里v是在介质粘度为η中半径为r的颗粒的移动速度。但在凝胶中,这种抗衡并不完全符合Stokes定律。F取决于介质中的其他因子,如凝胶厚度,颗粒大小,甚至介质的内渗等。

电泳迁移率(mbility)m规定为在电位梯度E的影响下,颗粒在时间t中的迁移距离d。

迁移率的不同提供了从混合物中分离物质的基础,迁移距离正比于迁移率。

参考资料来源:百度百科-电泳

关于本次电泳怎么做的问题分享到这里就结束了,如果解决了您的问题,我们非常高兴。

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